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ELISA試劑盒做標準曲線樣品檢測時需要注意

2017-01-17 [3141]

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ELISA試劑盒做標準曲線樣品檢測時需要注意:
1)設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,2)即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內,包括上限和下限,而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內。
3)樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。
3)用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
4)檢測標準樣品時,應按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
5)標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
6)做出的標準曲線相關系數(shù)因實驗要求不同而有所變動,但一般來說,相關系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999。
ELISA試劑盒浸泡式洗滌方式步驟:
(1)吸干或甩干孔內反應液;
(2)用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
(3)浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
(4)吸干孔內液體,吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
(5)重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。
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